1  原理及适用范围

菌落总数是指食品样品经过处理，在一定条件下培养后所得1mL(g)检样，是最常见的微生物检测项目。菌落总数测试片是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在测试片上呈红色，其优点在于缩短计数时间和便于计数。本产品适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定。

执行标准：食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定（GB 4789.2）。

新型凝胶型菌落总数测试片的特点：

1.菌落规则 

类似琼脂的凝胶，菌落生长三维分布，更好观察，易于计数。

2.无液化现象 

菌落总数检测片使用新的凝胶技术，芽孢杆菌等不会造成液化扩散现象，更易于观察计数 

3.不过度扩散 

新的抑制技术，控制霉菌菌丝过度扩散，菌落更集中。

4.准确可靠

配方经过多次调整，测试片与国标法对比，实验结果符合率高。

5.简单易用 

自扩散轻便设计，操作简单。 即用型无菌产品，免去制备过程，节省时间。

2  操作方法

2.1  样品处理：取样品 25 mL（g）放入含有225 mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，必要时用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液调节样品匀液pH至6.6~7.2。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，做出1:1000等稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。

2.2  接种：一般食品选2~3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。取菌落总数测试片置于平坦实验台面，翻开测试片盖膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液均匀地滴加到纸片上，等待纸片完全吸收液体，慢慢放下盖膜，每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。

2.3  培养： 将测试片叠放在一起，水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过10片。一般食品培养温度为36℃±1℃，培养15~24h；水产品培养温度为30℃±1℃，培养48h。

3  结果判读

     细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（30 CFU~300 CFU个）的测试片进行计数，乘以稀释倍数后即为每毫升（克）样品中所含的细菌菌落总数。

4  计数原则及报告方式

4.1  若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个纸片菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每毫升(或克)样品中菌落总数结果。

4.2  若有两个连续稀释度的纸片菌落数在适宜计数范围内时，按式(1)计算:

    ·········（1）

    式中：

    N——样品中菌落数；

    ∑C——测试片上(含适宜范围菌落数的测试片)菌落数之和；

    n₁——第一个适宜稀释度测试片数；

    n₂——第二个适宜稀释度测试片数；

   d——稀释因子(第一稀释度)。

   示例：

上述数据经“四舍五入”后，表示25000或2.5×10⁴。

4.3  若所有的稀释度菌落总数均大于300 CFU，则对稀释度最高的测试片进行计数，其他测试片可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

4.4  若所有的稀释度菌落总数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

4.5 若所有的稀释度（包括液体样品原液）均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

4.6  若所有稀释度的平均菌落数均不在30 CFU~300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU，则以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

4.7 菌落总数的报告

4.7.1 菌落数在100 CFU以内时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。

4.7.2 大于或等于100 CFU时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前两位数字，后面的0代替位数，也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。

4.7.3 若测试片上一片红色无法计数时，则报告多不可计。

4.7.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。

4.7.5称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。

5  附加说明

5.1菌落总数测试片检测结果与传统平板计数琼脂平板法符合率可达80％以上，山东省疾病预防控制中心进行的验证试验表明，24h计数测试片上菌落数为平板菌落数的87％。

5.2磷酸缓冲液稀释液的配制与灭菌：贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15分钟，或者放入消毒碗柜中消毒。

5.3生理盐水的配制与灭菌：取8.5g分析纯氯化钠（NaCl）溶解到1000mL蒸馏水或纯净水中，先煮开后进行分装，取9mL加入到10mL洁净试管中，盖上硅橡胶塞或棉纱塞，放入消毒柜中消毒。