1  方法原理

将乳糖胆盐选择性培养基和TTC显色剂加载在纸片上，经培养后能够在纸片上生长并发酵乳糖产酸的即为大肠菌群阳性，记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数，根据大肠菌群MPN表查出相应的大肠菌群数。

食品大肠菌群检验纸片法与国标法中的九管法相对应，将原来几步的试验简化为一步，时间由78h缩短为24h以内，省去了制备培养基、消毒和培养器皿的清洗处理等大量辅助性工作，随时可以打开包装进行抽样检测。

执行标准：食品卫生微生物学检验大肠菌群计数（GB/T 4789.3）。

适用于各类食品、饮料等样品中大肠菌群的快速测定。

2  操作方法

2.1  样品处理：按无菌操作称取样品25g（或25mL）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样瓶或均质杯中，经充分振摇做成1：10的样品匀液。样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸调节。用1mL灭菌吸管吸取1：10样品匀液，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇试管制成1：100的样品匀液。根据对样品污染状况的估计，按上述操作，一次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换一支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。

2.2  接种

2.2.1  选取两个稀释度进行接种，普通食品一般采用1：10和1：100这两个稀释度，饮料采用原液和1：10两个稀释度。本品每份由三片大纸片（接10mL，袋中二片叠放算作一大片），六片小纸片（接1mL）组成。

2.2.2  用灭菌吸管吸取10 mL 1：10样品匀液加到含有大纸片的塑料袋中（相当于接样品1g），吸透后平放，做三个重复。再用1mL灭菌吸管吸取1 mL同一稀释度的样品匀液液加到含有小纸片的塑料袋中（相当于接样品0.1g），做三个重复。再另取一支1 mL灭菌吸管吸取1 mL 1：100样品匀液加到含有小纸片的塑料袋中（相当于接样品0.01g），做三个重复。

2.3  培养：将接种好的纸片（可叠放）放入36℃±1℃培养箱中培养15～24h。

3  大肠菌群最可能数（MPN）的报告

3.1  若纸片变黄或在黄色背景上呈现红色斑点为大肠菌群阳性纸片。纸片保持紫兰色不变或在紫兰色背景上呈现红色斑点，但周围没有黄色均为大肠菌群阴性纸片。

3.2  记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数，根据大肠菌群MPN表查出相应的大肠菌群数。

3.3  如接种的第一个梯度为原液，应将表上查出的结果除以10。

4  注意事项

    新的国家标准所用的单位改为每克（或毫升）检样中大肠菌群最可能数，标准的接种量为0.333g（mL），MPN表也是由此而设计。而使用本品的标准接种量为3.33g（mL），大纸片接种10mL 1：10样品匀液相当于1g样品，因而表内数字应相应降低10倍。饮料样品的接种量为33.3mL，大纸片接种10mL样品原液，表内数字应降低100倍。

5  保存条件

产品需放在4-10℃冰箱中，保持期为一年，铝箔袋打开后，未用完的纸片要放回铝箔袋中封好，放到冰箱中，一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水，最好在拆封前将整包回温到室温。